FastQ QC - A.pulchra RNA-seq from Azenta Project 30-1047560508

2024
RNA-seq
30-1047560508
Azenta
coral
Acropora pulchra
FastQC
MultiQC
timeseries_molecular
E5
Author

Sam White

Published

October 4, 2024

Note

This notebook entry is knitted from urol-e5/timeseries_molecular/D-Apul/code/00.00-D-Apul-RNAseq-reads-FastQC-MultiQC.Rmd (GitHub), commit b7a80be.

This Rmd file will download raw RNA-seq FastQs for A.pulchra and evaluate them using FastQC and MultiQC (Ewels et al. 2016).

1 Create a Bash variables file

This allows usage of Bash variables across R Markdown chunks.

{
echo "#### Assign Variables ####"
echo ""

echo "# Data directories"
echo 'export timeseries_dir=/home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular'
echo 'export output_dir_top=${timeseries_dir}/D-Apul/output/00.00-D-Apul-RNAseq-reads-FastQC-MultiQC'
echo 'export raw_fastqc_dir=${timeseries_dir}/D-Apul/${output_dir_top}/raw-fastqc'
echo 'export raw_reads_dir=${timeseries_dir}/D-Apul/data/raw-fastqs'
echo 'export raw_reads_url="https://owl.fish.washington.edu/nightingales/E5-coral-time-series/30-1047560508/"'
echo ""

echo "# Paths to programs"
echo 'export fastqc=/home/shared/FastQC-0.12.1/fastqc'
echo 'export multiqc=/home/sam/programs/mambaforge/bin/multiqc'
echo ""

echo "# Set FastQ filename patterns"
echo "export fastq_pattern='*.fastq.gz'"
echo "export R1_fastq_pattern='*_R1_*.fastq.gz'"
echo "export R2_fastq_pattern='*_R2_*.fastq.gz'"
echo ""

echo "# Set number of CPUs to use"
echo 'export threads=40'
echo ""


echo "## Inititalize arrays"
echo 'export fastq_array_R1=()'
echo 'export fastq_array_R2=()'
echo 'export raw_fastqs_array=()'
echo 'export R1_names_array=()'
echo 'export R2_names_array=()'
echo ""

echo "# Programs associative array"
echo "declare -A programs_array"
echo "programs_array=("
echo '[fastqc]="${fastqc}" \'
echo '[multiqc]="${multiqc}" \'
echo ")"
echo ""

echo "# Print formatting"
echo 'export line="--------------------------------------------------------"'
echo ""
} > .bashvars

cat .bashvars
#### Assign Variables ####

# Data directories
export timeseries_dir=/home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular
export output_dir_top=${timeseries_dir}/D-Apul/output/00.00-D-Apul-RNAseq-reads-FastQC-MultiQC
export raw_fastqc_dir=${timeseries_dir}/D-Apul/${output_dir_top}/raw-fastqc
export raw_reads_dir=${timeseries_dir}/D-Apul/data/raw-fastqs
export raw_reads_url="https://owl.fish.washington.edu/nightingales/E5-coral-time-series/30-1047560508/"

# Paths to programs
export fastqc=/home/shared/FastQC-0.12.1/fastqc
export multiqc=/home/sam/programs/mambaforge/bin/multiqc

# Set FastQ filename patterns
export fastq_pattern='*.fastq.gz'
export R1_fastq_pattern='*_R1_*.fastq.gz'
export R2_fastq_pattern='*_R2_*.fastq.gz'

# Set number of CPUs to use
export threads=40

## Inititalize arrays
export fastq_array_R1=()
export fastq_array_R2=()
export raw_fastqs_array=()
export R1_names_array=()
export R2_names_array=()

# Programs associative array
declare -A programs_array
programs_array=(
[fastqc]="${fastqc}" \
[multiqc]="${multiqc}" \
)

# Print formatting
export line="--------------------------------------------------------"

2 Download A.pulchra RNA-seq FastQs

2.1 Download raw RNA-seq reads

Reads are downloaded from https://owl.fish.washington.edu/nightingales/E5-coral-time-series/30-1047560508/

Since sequencing included multiple species, the code will also parse only those that are A.pulchra.

The --cut-dirs 3 command cuts the preceding directory structure (i.e. nightingales/E5-coral-time-series/30-1047560508/) so that we just end up with the reads.

# Load bash variables into memory
source .bashvars

# Make output directory if it doesn't exist
mkdir --parents ${raw_reads_dir}

# Create list of only A.pulchra sample names
sample_list=$(awk -F "," 'NR > 2 {print $5"\t"$6}' ${timeseries_dir}/data/rna_metadata.csv | awk -F"[\t-]" '$2 == "ACR" {print $1}')

echo ""
echo "${line}"
echo ""
echo "Sample list:"
echo ""
echo "${sample_list}"
echo ""
echo "${line}"
echo ""


# Use printf to format each item for use in wget
formatted_list=$(printf "*%s*," ${sample_list})

# Remove the trailing comma and append *.md5
formatted_list="${formatted_list%,},*.md5"

# Output the final wget command
echo ""
echo "${line}"
echo ""
echo "Formatted wget accept list:"
echo ""
echo "wget --accept=\"$formatted_list\""
echo ""
echo "${line}"
echo ""

# Run wget to retrieve FastQs and MD5 files
wget \
--directory-prefix ${raw_reads_dir} \
--recursive \
--no-check-certificate \
--continue \
--cut-dirs 3 \
--no-host-directories \
--no-parent \
--quiet \
--accept=\"$formatted_list\" ${raw_reads_url}

ls -lh "${raw_reads_dir}"
awk: fatal: cannot open file `/home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular/data/rna_metadata.csv' for reading (No such file or directory)

--------------------------------------------------------

Sample list:



--------------------------------------------------------


--------------------------------------------------------

Formatted wget accept list:

wget --accept="**,*.md5"

--------------------------------------------------------

total 116G
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 08:30 10--1B2_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 08:30 10--1B2_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 08:32 10--1B2_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 08:32 10--1B2_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 2.1G Oct  3 08:42 102--2F1_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 08:42 102--2F1_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 2.1G Oct  3 08:45 102--2F1_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 08:45 102--2F1_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 08:46 103--2G1_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 08:46 103--2G1_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 08:48 103--2G1_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 08:48 103--2G1_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 08:57 106--2B2_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 08:57 106--2B2_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 08:59 106--2B2_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 08:59 106--2B2_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 09:01 107--2C2_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:01 107--2C2_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 09:03 107--2C2_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:03 107--2C2_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 09:05 108--2D2_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:05 108--2D2_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 09:07 108--2D2_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:07 108--2D2_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 09:09 109--2E2_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:09 109--2E2_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 09:11 109--2E2_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:11 109--2E2_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 09:31 114--2B3_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:31 114--2B3_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 09:33 114--2B3_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 09:33 114--2B3_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 08:26 1--1A1_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 08:26 1--1A1_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 08:28 1--1A1_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 08:28 1--1A1_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 10:20 20--1D3_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:20 20--1D3_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 10:21 20--1D3_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:21 20--1D3_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 10:23 21--1E3_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:23 21--1E3_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 10:25 21--1E3_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:25 21--1E3_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 10:16 2--1B1_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 10:16 2--1B1_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 10:18 2--1B1_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 10:18 2--1B1_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 10:45 27--1C4_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:45 27--1C4_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 10:47 27--1C4_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:47 27--1C4_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 10:49 28--1D4_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:49 28--1D4_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 10:51 28--1D4_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 10:51 28--1D4_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 11:00 30--1F4_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:00 30--1F4_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 11:02 30--1F4_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:02 30--1F4_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 11:17 34--1B5_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:17 34--1B5_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 11:19 34--1B5_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:19 34--1B5_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 11:28 37--1E5_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:28 37--1E5_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 11:30 37--1E5_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:30 37--1E5_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 11:36 39--1G5_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:36 39--1G5_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 11:38 39--1G5_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:38 39--1G5_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 11:56 44--1D6_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:56 44--1D6_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 11:58 44--1D6_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 11:58 44--1D6_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 12:20 5--1E1_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 12:20 5--1E1_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 12:22 5--1E1_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 12:22 5--1E1_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 12:44 56--1H7_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 12:44 56--1H7_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 12:45 56--1H7_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 12:45 56--1H7_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 12:47 57--1A8_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 12:47 57--1A8_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 12:48 57--1A8_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 12:48 57--1A8_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 13:00 60--1D8_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:01 60--1D8_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 13:02 60--1D8_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:02 60--1D8_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 13:08 62--1F8_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:08 62--1F8_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 13:11 62--1F8_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:11 62--1F8_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 13:17 64--1H8_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:17 64--1H8_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 13:18 64--1H8_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:18 64--1H8_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 13:20 65--1A9_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:20 65--1A9_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 13:23 65--1A9_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:23 65--1A9_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.7G Oct  3 13:25 66--1B9_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:25 66--1B9_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 13:27 66--1B9_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:27 66--1B9_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 13:33 68--1D9_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:33 68--1D9_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.6G Oct  3 13:35 68--1D9_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:35 68--1D9_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 13:38 69--1E9_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:38 69--1E9_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 13:40 69--1E9_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 13:40 69--1E9_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 13:55 73--1A10_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 13:56 73--1A10_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 13:58 73--1A10_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 13:58 73--1A10_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 13:59 74--1B10_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 13:59 74--1B10_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 14:01 74--1B10_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:01 74--1B10_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:03 75--1C10_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:03 75--1C10_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:05 75--1C10_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:05 75--1C10_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 14:07 76--1D10_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:07 76--1D10_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 14:09 76--1D10_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:09 76--1D10_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 14:11 77--1E10_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:11 77--1E10_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 14:13 77--1E10_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:13 77--1E10_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:29 81--1A11_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:29 81--1A11_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 14:30 81--1A11_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:30 81--1A11_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:32 82--1B11_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:32 82--1B11_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:34 82--1B11_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:34 82--1B11_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 14:44 85--1E11_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:44 85--1E11_R1_001.fastq.gz.md5
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-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:45 85--1E11_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 14:47 86--1F11_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:47 86--1F11_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 14:49 86--1F11_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:49 86--1F11_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:57 89--1A12_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:57 89--1A12_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.2G Oct  3 14:58 89--1A12_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 14:58 89--1A12_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 15:04 90--1B12_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 15:04 90--1B12_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 15:06 90--1B12_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 15:06 90--1B12_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 15:00 9--1A2_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 15:00 9--1A2_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.5G Oct  3 15:02 9--1A2_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   59 Oct  3 15:02 9--1A2_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 15:15 93--1E12_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 15:15 93--1E12_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.4G Oct  3 15:17 93--1E12_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 15:17 93--1E12_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 15:27 96--1H12_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 15:27 96--1H12_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.1G Oct  3 15:29 96--1H12_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   61 Oct  3 15:29 96--1H12_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 15:38 99--2C1_R1_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 15:38 99--2C1_R1_001.fastq.gz.md5
-rw-r--r-- 1 sam sam 1.3G Oct  3 15:40 99--2C1_R2_001.fastq.gz
-rw-r--r-- 1 sam sam   60 Oct  3 15:40 99--2C1_R2_001.fastq.gz.md5
-rw-rw-r-- 1 sam sam  138 Oct  4 10:52 README.md

2.2 Verify raw read checksums

# Load bash variables into memory
source .bashvars

cd "${raw_reads_dir}"

# Checksums file contains other files, so this just looks for the sRNAseq files.
for file in *.md5
do
  md5sum --check "${file}"
done
./10--1B2_R1_001.fastq.gz: OK
./10--1B2_R2_001.fastq.gz: OK
./102--2F1_R1_001.fastq.gz: OK
./102--2F1_R2_001.fastq.gz: OK
./103--2G1_R1_001.fastq.gz: OK
./103--2G1_R2_001.fastq.gz: OK
./106--2B2_R1_001.fastq.gz: OK
./106--2B2_R2_001.fastq.gz: OK
./107--2C2_R1_001.fastq.gz: OK
./107--2C2_R2_001.fastq.gz: OK
./108--2D2_R1_001.fastq.gz: OK
./108--2D2_R2_001.fastq.gz: OK
./109--2E2_R1_001.fastq.gz: OK
./109--2E2_R2_001.fastq.gz: OK
./114--2B3_R1_001.fastq.gz: OK
./114--2B3_R2_001.fastq.gz: OK
./1--1A1_R1_001.fastq.gz: OK
./1--1A1_R2_001.fastq.gz: OK
./20--1D3_R1_001.fastq.gz: OK
./20--1D3_R2_001.fastq.gz: OK
./21--1E3_R1_001.fastq.gz: OK
./21--1E3_R2_001.fastq.gz: OK
./2--1B1_R1_001.fastq.gz: OK
./2--1B1_R2_001.fastq.gz: OK
./27--1C4_R1_001.fastq.gz: OK
./27--1C4_R2_001.fastq.gz: OK
./28--1D4_R1_001.fastq.gz: OK
./28--1D4_R2_001.fastq.gz: OK
./30--1F4_R1_001.fastq.gz: OK
./30--1F4_R2_001.fastq.gz: OK
./34--1B5_R1_001.fastq.gz: OK
./34--1B5_R2_001.fastq.gz: OK
./37--1E5_R1_001.fastq.gz: OK
./37--1E5_R2_001.fastq.gz: OK
./39--1G5_R1_001.fastq.gz: OK
./39--1G5_R2_001.fastq.gz: OK
./44--1D6_R1_001.fastq.gz: OK
./44--1D6_R2_001.fastq.gz: OK
./5--1E1_R1_001.fastq.gz: OK
./5--1E1_R2_001.fastq.gz: OK
./56--1H7_R1_001.fastq.gz: OK
./56--1H7_R2_001.fastq.gz: OK
./57--1A8_R1_001.fastq.gz: OK
./57--1A8_R2_001.fastq.gz: OK
./60--1D8_R1_001.fastq.gz: OK
./60--1D8_R2_001.fastq.gz: OK
./62--1F8_R1_001.fastq.gz: OK
./62--1F8_R2_001.fastq.gz: OK
./64--1H8_R1_001.fastq.gz: OK
./64--1H8_R2_001.fastq.gz: OK
./65--1A9_R1_001.fastq.gz: OK
./65--1A9_R2_001.fastq.gz: OK
./66--1B9_R1_001.fastq.gz: OK
./66--1B9_R2_001.fastq.gz: OK
./68--1D9_R1_001.fastq.gz: OK
./68--1D9_R2_001.fastq.gz: OK
./69--1E9_R1_001.fastq.gz: OK
./69--1E9_R2_001.fastq.gz: OK
./73--1A10_R1_001.fastq.gz: OK
./73--1A10_R2_001.fastq.gz: OK
./74--1B10_R1_001.fastq.gz: OK
./74--1B10_R2_001.fastq.gz: OK
./75--1C10_R1_001.fastq.gz: OK
./75--1C10_R2_001.fastq.gz: OK
./76--1D10_R1_001.fastq.gz: OK
./76--1D10_R2_001.fastq.gz: OK
./77--1E10_R1_001.fastq.gz: OK
./77--1E10_R2_001.fastq.gz: OK
./81--1A11_R1_001.fastq.gz: OK
./81--1A11_R2_001.fastq.gz: OK
./82--1B11_R1_001.fastq.gz: OK
./82--1B11_R2_001.fastq.gz: OK
./85--1E11_R1_001.fastq.gz: OK
./85--1E11_R2_001.fastq.gz: OK
./86--1F11_R1_001.fastq.gz: OK
./86--1F11_R2_001.fastq.gz: OK
./89--1A12_R1_001.fastq.gz: OK
./89--1A12_R2_001.fastq.gz: OK
./90--1B12_R1_001.fastq.gz: OK
./90--1B12_R2_001.fastq.gz: OK
./9--1A2_R1_001.fastq.gz: OK
./9--1A2_R2_001.fastq.gz: OK
./93--1E12_R1_001.fastq.gz: OK
./93--1E12_R2_001.fastq.gz: OK
./96--1H12_R1_001.fastq.gz: OK
./96--1H12_R2_001.fastq.gz: OK
./99--2C1_R1_001.fastq.gz: OK
./99--2C1_R2_001.fastq.gz: OK

3 FastQC/MultiQC on raw reads

# Load bash variables into memory
source .bashvars

# Make output directory if it doesn't exist
mkdir --parents "${raw_fastqc_dir}"

############ RUN FASTQC ############


# Create array of trimmed FastQs
raw_fastqs_array=(${raw_reads_dir}/${fastq_pattern})

# Pass array contents to new variable as space-delimited list
raw_fastqc_list=$(echo "${raw_fastqs_array[*]}")

echo "Beginning FastQC on raw reads..."
echo ""

# Run FastQC
### NOTE: Do NOT quote raw_fastqc_list
${programs_array[fastqc]} \
--threads ${threads} \
--outdir ${raw_fastqc_dir} \
--quiet \
${raw_fastqc_list}

echo "FastQC on raw reads complete!"
echo ""

############ END FASTQC ############

############ RUN MULTIQC ############
echo "Beginning MultiQC on raw FastQC..."
echo ""

${programs_array[multiqc]} ${raw_fastqc_dir} -o ${raw_fastqc_dir}

echo ""
echo "MultiQC on raw FastQs complete."
echo ""

############ END MULTIQC ############

echo "Removing FastQC zip files."
echo ""
rm ${raw_fastqc_dir}/*.zip
echo "FastQC zip files removed."
echo ""

# View directory contents
ls -lh ${raw_fastqc_dir}
Beginning FastQC on raw reads...

application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
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application/gzip
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application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
application/gzip
FastQC on raw reads complete!

Beginning MultiQC on raw FastQC...


  /// MultiQC 🔍 | v1.14

|           multiqc | MultiQC Version v1.25.1 now available!
|           multiqc | Search path : /home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular/D-Apul/home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular/D-Apul/output/00.00-D-Apul-RNAseq-reads-FastQC-MultiQC/raw-fastqc
|         searching | ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 100% 176/176  
|            fastqc | Found 88 reports
|           multiqc | Compressing plot data
|           multiqc | Report      : ../home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular/D-Apul/output/00.00-D-Apul-RNAseq-reads-FastQC-MultiQC/raw-fastqc/multiqc_report.html
|           multiqc | Data        : ../home/shared/8TB_HDD_01/sam/gitrepos/urol-e5/timeseries_molecular/D-Apul/output/00.00-D-Apul-RNAseq-reads-FastQC-MultiQC/raw-fastqc/multiqc_data
|           multiqc | MultiQC complete
|           multiqc | 1 flat-image plot used in the report due to large sample numbers
|           multiqc | To force interactive plots, use the '--interactive' flag. 
See the documentation.

MultiQC on raw FastQs complete.

Removing FastQC zip files.

FastQC zip files removed.

total 55M
-rw-r--r-- 1 sam sam 603K Oct  7 09:15 10--1B2_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 604K Oct  7 09:15 10--1B2_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:18 102--2F1_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 605K Oct  7 09:18 102--2F1_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 599K Oct  7 09:14 103--2G1_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 605K Oct  7 09:15 103--2G1_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:16 106--2B2_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 600K Oct  7 09:16 106--2B2_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 602K Oct  7 09:15 107--2C2_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:15 107--2C2_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 603K Oct  7 09:16 108--2D2_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 604K Oct  7 09:16 108--2D2_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 610K Oct  7 09:14 109--2E2_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 608K Oct  7 09:14 109--2E2_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:15 114--2B3_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 600K Oct  7 09:15 114--2B3_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:14 1--1A1_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 608K Oct  7 09:15 1--1A1_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:14 20--1D3_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 596K Oct  7 09:14 20--1D3_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 602K Oct  7 09:15 21--1E3_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 602K Oct  7 09:14 21--1E3_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 604K Oct  7 09:15 2--1B1_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 605K Oct  7 09:15 2--1B1_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 602K Oct  7 09:16 27--1C4_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 604K Oct  7 09:15 27--1C4_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 599K Oct  7 09:17 28--1D4_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 602K Oct  7 09:16 28--1D4_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 599K Oct  7 09:15 30--1F4_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 603K Oct  7 09:14 30--1F4_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 595K Oct  7 09:16 34--1B5_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 605K Oct  7 09:16 34--1B5_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 600K Oct  7 09:14 37--1E5_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 599K Oct  7 09:14 37--1E5_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 600K Oct  7 09:16 39--1G5_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 607K Oct  7 09:16 39--1G5_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 603K Oct  7 09:15 44--1D6_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 603K Oct  7 09:15 44--1D6_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 600K Oct  7 09:16 5--1E1_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 600K Oct  7 09:16 5--1E1_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 601K Oct  7 09:19 56--1H7_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 602K Oct  7 09:19 56--1H7_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 604K Oct  7 09:19 57--1A8_R1_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 605K Oct  7 09:19 57--1A8_R2_001_fastqc.html
-rw-r--r-- 1 sam sam 603K Oct  7 09:19 60--1D8_R1_001_fastqc.html
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Ewels, Philip, Måns Magnusson, Sverker Lundin, and Max Käller. 2016. “MultiQC: Summarize Analysis Results for Multiple Tools and Samples in a Single Report.” Bioinformatics 32 (19): 3047–48. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btw354.
Ewels, Philip, Måns Magnusson, Sverker Lundin, and Max Käller. 2016. “MultiQC: Summarize Analysis Results for Multiple Tools and Samples in a Single Report.” Bioinformatics 32 (19): 3047–48. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btw354.